高效液相色譜儀操作流程
高效液相色譜儀操作流程為開機、超聲、排氣、走基線。
1、開機前先將流動相過濾和超聲:水流動相用混合濾膜(0.2μm)過濾,有機流動相用有機濾膜過濾,之后超聲脫氣15-20分鐘。(過濾的目的是除去流動相里的雜質,以免雜質進入色譜柱堵塞色譜柱;超聲的目的是排除流動相里面的氣體,以防氣體進入色譜柱損害色譜柱,影響柱效能)
注意:試驗過程中由于只有0.45μm的混合濾膜,第一次使用時感覺效果不好,于是過濾水時同時使用兩張混合濾膜過濾水流動相。
2、超聲結束后,將流動相放置到規定位置(1號泵接水流動相,2號泵接有機流動相),開機逐個排氣(先啟動泵,排氣結束后再打開檢測器)。
3、排氣結束后,關閉所有排氣閥。先用純有機流動相沖洗色譜柱20-30分鐘,基線走穩之后,再打開水流動相(注意:水流動相和有機流動相流速之和為1ml/min),繼續走基線,直到基線平穩。
注意:實驗結束后,再用純有機流動相沖洗色譜柱20-30分鐘,沖出色譜柱內殘留的樣品物質,預防長時間不使用儀器樣品的殘留物質沉積在色譜柱內,導致下次使用難以沖出,色譜柱柱壓偏高,基線不穩,出現大量鬼峰。
4、走基線時,應將進樣閥處于Load狀態,用注射器進樣時應快速進樣,進樣后將進樣閥立即扳回到Inject狀態,此時液相系統開始進入采樣狀態。采樣結束后,可在數據分析里面查看分析結果并可進行編輯,也可以在脫機狀態下查看樣品的分析結果并編輯。
數據分析:
色譜得到的原始數據為色譜圖,我們需要對途中的色譜峰進行積分,獲得峰面積,并根據實驗需要,使用不同的方法進行定量計算,比如外標法,內標法,面積百分比法等。
儀器還可以得到光譜或者質譜信息,我們可以通過色譜柱數據軟件的對應功能得到光譜圖及質譜圖,獲得定性信息。
獲得所需信息后,可以利用色譜軟件將結果輸出成不同格式的報告,或將處理好的結果導入其他軟件(如統計分析)進行二次處理。