紫外分光光度計的使用步驟
1 開光譜儀電源
2 開計算機電源
3 在文件管理器中用鼠標指按UV WinLab圖標,此時出現UV WinLab的應用窗口,儀器已準備好,可選用適當方法進行分析操作。
2 方法:在分析中必須對分光光度計設定一些必要的參數,這些參數的組合就形成一個“方法”。Lambda系列UV WinLab軟件預設四類常用方法。
1)掃描(SCAN),用以進行光譜掃描。
2)時間驅動(TIME DRIVER),用以觀察一定時間內某種特定波長處縱坐標值的變化,如酶動力學。
3)波長編程(WP)用以在多個波長下測定樣品在一定時間內的縱坐標值變化,并可以計算這些縱坐標值的差或比值。
4)濃度(CONC)用以建立標準曲線并測定濃度。
2.1 進入所需方法,在方法窗口中選擇所需方法的文件名。
2.2 方法的設定
2.2.1 掃描、波長編程及時間驅動
各項方法可根據顯示的參數表,逐項按需要選用或填入,并可參考提示。
2.2.2 濃度
濃度方法窗口下方標簽較多,說明做濃度測定時需要參數較多。用鼠標指按每一標簽,可翻出下頁,其上有一些需要測定的參數。必須逐頁設定。
3 工具條
3.1 SETUP
當所需的各項參數都已在參數中設好后,必須用鼠標指按SETUP,才能將儀器調整到所設狀態。
3.2 AUTOZERO
用鼠標指按此鍵,分光光度計即進行調零(在光譜掃描中則進行基線校正)。
3.3 START
用鼠標指按此鍵,光度計即開始運行所設定的方法。
4 方法運行
4.1 掃描,時間驅動,波長編程
方法選好后,先放入參比溶液,按AUTOZERO鍵,進行自自動校零或背景校正結束后再放入樣品,按START,分光光度計即開始進行,同時屏幕上出現圖形窗口,將結果顯示出來。
4.2 濃度
4.2.1制訂標準曲線
1 方法選好后,確認各項數據正確,特別是REFS頁中第一行要選中右上角的“edit mode”。再放入參比溶液,按AUTOZERO鍵自動校零或背景校正。
2 按setup,待該圖標消失后,再按“start”,按提示依次放入標準色列的各管溶液,每次都按提示進行操作。
3 標準色列測定
完畢后,屏幕上出現calibgraphwindow,顯示擬合的標準線,并標出各項標準管的位置,屏幕下方還有一條Concentration mode的對話框,可以用來修改擬合的曲線類型(按 change calbration),或修改標準溶液的任何一管(replace),或取消某一管(delete),或增加標準溶液管數(add)。如過已經滿意,則按analyse sample鍵,進入樣品測定窗口。
4 標準曲線有關的各項數據,均在calibresultwindow中,可用鼠標將其調出觀察。其中包括每個標準溶液的具體數據,標準曲線的回程方程式,相關系數,殘差。
4.2.2樣品濃度測定
4.2.2.1剛制定好的標準曲線接著進行樣品濃度測定時
1 只需在concentration mode對話框按analyse sample鍵,進入樣品測定窗口。
2 按設定的樣品順序放入各樣品管,每次按提示進行操作。
3 屏幕上出現結果窗口,結果數據將依次顯示在樣品表中的相應位置。
4.2.2.2利用原有的標準曲線接著進行樣品濃度測定時
4.2.2.2.1 調出所測定樣品的濃度方法文件,首先調出refs頁,將原設edit mode選項取消,改設左上角的using exiting
calibration。重新將方法存盤,則今后再調用時即不需再作修改。
4.2.2.2.2 在sample頁中按要求重設各種樣品名稱機樣品信息。
4.2.2.2.3 按工具條中setup鍵,將主機設到該方法所設定的條件。
4.2.2.2.4 將參比溶液放入比色室,按autozero鍵做背景校零。
4.2.2.2.5 按start鍵,按設定的樣品順序放入各樣品管,每次按提示進行操作。
4.2.2.2.6 屏幕上出現結果窗口,結果數據將依次顯示在樣品表中相應位置。