近紅外Western Blot實驗需要關注的5個重點
化學發光Western Blot的流程大家再熟悉不過，近紅外熒光Western與化學發光步驟基本相似，但是有些小伙伴做不好熒光Western，小編給大家總結了做熒光Western的幾點注意事項：
一、做近紅外熒光Western選擇低熒光背景膜，降低膜對信號的影響。
二、選擇合適的封閉液，沒有一種封閉液適用所有的Western Blot檢測，需要大家進行優化，如果做磷酸化蛋白檢測，不建議使用牛奶為基礎的封閉液，如果做酪氨酸蛋白，不建議使用BSA為基礎的封閉液，Azure提供熒光封閉試劑，減少非特異性條帶結合，降低背景。
三、漂洗也是非常重要的一步，使用干凈的孵育盒，足夠多的漂洗液，一般含有吐溫的濃度0.1%-0.2%，如果背景特別高，加入少量的SDS可以明顯降低背景，SDS添加只能用于PVDF膜，濃度一般為0.01%-0.02%。Azure提供熒光印跡漂洗buffer，減少熒光二抗的非特異性結合，從而產生高信噪比的印跡。
四、選擇特異性好的抗體，兩種一抗必須來自不同的宿主，才能被不同特異性的二抗所識別。Azure提供熒光標記試劑盒，熒光Western Blot實驗試劑盒和近紅外二抗，滿足客戶的需求。
五、近紅外熒光印跡膜的成像，需要成像儀器具有近紅外熒光光源，現在進行近紅外染料激發最好的激光光源，Azure Imager和Sapphire都采用的激光光源，具有激發強度大，單色性好，信噪比高，背景低等特點。
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